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你是那10%正确使用Millipore超滤管的达人吗?

超滤是大分子脱盐、浓缩最方便的方法,重复性好,得率有保障,已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作;在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法(资料备索)。


Millipore的Amicon® Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是,在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前,我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得最佳体验,更重要的是,宝贵的样本会遭受本可避免的损失!

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选对截留分子量,事半功倍

如果目的蛋白是120kDa,请问应该选择的超滤管规格是100k,50k,还是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?这些没有统一的说法,是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。Millipore的超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel®再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据:

(以0.5mL的AU0.5为例,其它型号截留分子量的选择原则一致,具体离心力和离心时间不同。)

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截留分子量选小啦!看到这个表,你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对于Millipore截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是第一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子),在Millipore再生纤维素超滤膜体系内,选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是最佳选择,这样操作起来又快又好,既保证了样品回收率,又缩短了离心时间,大幅降低大分子损伤风险。


因为样品分子形状不同,为了最大化样品的回收,对于没有参考的样品,可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的超滤管。


倒转离心,最大化回收率

收取体积已经很小的浓缩好的样品时,你会:

购买最尖细的枪头,把样品吸回来 

浓缩倍数低一点,以便用枪头把样品吸回来

反转离心回收,获得最高得率

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正确答案“C”,你答对了么?




Millipore的Amicon® Ultra系列超滤管上样体积有0.5/2/4/15/70mL等五种,除了采用低吸附的管材和最低蛋白吸附的再生纤维素超滤膜,其中0.5mL,2mL和70mL的规格还特别设计了反转回收模式,以便使已经浓缩的样品最大化回收。


现在你总该知道为什么收到AU0.5的时候会有两个外管了吧~


脱盐浓缩,一个超滤管搞定

浓缩用超滤管,脱盐用透析袋或脱盐柱,这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢,超滤管做“脱盐+浓缩”,也是很多蛋白操作高手的小诀窍。我们Millipore官方中文说明书特别给大家提示了这个方法——用更少的工具和更短的时间,减少转移误操作和样品损失,却能获得更好处理效果,你get了吗?

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