SAINT-BIO/尚宝生物 28103 离心柱式血液基因组提取试剂盒

离心柱式血液基因组提取试剂盒

产品货号：28103

产品规格：50次/100次/200次

产品简介：

    本试剂盒采用高盐法提取血液中的基因组DNA，可Γ大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

    使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

自备试剂：无水乙醇。使用前Buffer PW50次加入39ml无水乙醇/100次加入77ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇

包装清单：

操作步骤：

以下步骤以提取2mL血液中基因组为例，具体实验可根据血液量等比例减少。

1. 于离心管中加入2mLBuffer A和2mL预冷的超纯水。上下颠倒6-8次，冰上孵育2-3min。

2. 3500rpm离心15min，弃上清。

3. 加入150μl Buffer B，剧烈涡旋30-60s至沉淀重新散裂，加入5μl Proteinase K溶液，充分颠倒混匀，56℃放置10 min，其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮（如溶液未彻底变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止）。

注意：加入缓冲液Buffer B时可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯，需等比例补加Buffer B及Proteinase K。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。

4. 加入3倍体积的 Buffer PG（约0.45mL），涡旋充分混匀。

5. 柱平衡：向已装入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 将步骤3所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中（如步骤3所得溶液体积过大，可分次加入吸附柱中，12000 rpm离心1分钟，弃流穿液）。

7. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。

8. 重复步骤6。

9. 12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

10. 将吸附柱放到一个新的1.5 ml离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加50μlBuffer EB，室温放置2分钟。12000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：

1) 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

2) 为了提高基因组提取量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，12000 rpm离心1分钟。

3) 洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。

注意事项：

1. Γ次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

2. 若Buffer B中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3. 所有离心步骤均可室温下进行。