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产品基本说明：
| 用分子生物学技术研究复杂的基因组，首先要求制备纯净的高分子质量DNA，一般分为两个步骤，先裂解细胞、溶解DNA，接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。尚宝生物 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组 DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为，从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从10 ～10 Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。 |
哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒
产品货号：11065
产品规格：50T/100T
产品简介：
用分子生物学技术研究复杂的基因组，首先要求制备纯净的高分子质量DNA，一般分为两个步骤，先裂解细胞、溶解DNA，接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。尚宝生物 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组 DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为，从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从10 ～10 Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
试剂盒内容 | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂(A): 样品裂解液 | 50ml | 100ml | 4℃ |
试剂(B): 蛋白酶K溶液 | 150μl | 300μl | -20℃，避光 |
试剂(C): 乙酸铵溶液 | 10ml | 20ml | 室温 |
试剂(D): Nuclease Free Water | 10ml | 20ml | 室温 |
自备材料：
1. 组织或培养细胞
2. PBS
3. 无水乙醇、70%乙醇
4. 25:24:1 酚/氯仿/异戊醇
操作步骤 (仅供参考) ：
1. 准备样品：
①组织样本：切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。将100mg～1g冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末。培养细胞：收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液，贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用PBS清洗一次。4℃离心机，1000～2000g离心1～2min，弃上清。用1～10ml预冷的PBS再次悬浮离心，如此2次洗涤。
2. 每1ml样品裂解液加入5μl的蛋白酶K溶液，混匀。每50mg组织或5×107细胞用0.5～0.6ml样品裂解液悬浮，悬浮应彻底，不应留下结块。
3. 充分混匀，50℃振荡下温育12～18h或过夜。
4. 加入等体积25:24:1酚/氯仿/异戊醇，轻轻混合，尽可能减少对DNA的剪切。
5. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积酚/氯仿/异戊醇再抽提一次。重复该步骤1次。
6. 吸取上层液(水溶液)250～300μl 至新EP管中，加入等体积无水乙醇和1/4体积的乙酸铵溶液，颠倒混匀数次。
7. 4℃ 10000g 1min，弃上清。
8. 加入70%乙醇，4℃ 10000g 1min，弃上清。重复该步骤一次。
9. 尽量吸除残余的乙醇，空气干燥，等到不到明显液体时，立即加入50～100μl Nuclease Free Water溶解DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。
10. A 260 /A 280 处检测DNA纯度，高纯度的DNA一般A 260 /A 280＞1.8。
注意事项：
1. 如果打算提取大片段的基因组DNA，应尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组DNA的样品。
2. 准备细胞样品时，如果细胞量过少(＜3×107 )，应0.3ml含蛋白酶K的样品裂解液。
3. 为避免高分子质量DNA被剪切，可以不采用乙醇沉淀DNA，可用透析袋替代乙醇：在100倍体积的TE buffer中至少透析2次，所用取全部时间应＞24h。
4. 不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
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