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产品基本说明:
产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取 血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。 本产品使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。 |
全血基因组DNA提取系统(沉淀法)
产品货号:26237
产品规格:50T/100T
产品简介:
产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取 血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。
本产品使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。
处理血液量 | 1ml | 5ml | 10ml |
红细胞裂解液(1×) | 5ml | 25ml | 50ml |
白细胞裂解液 | 0.5ml | 2.5ml | 5ml |
蛋白沉淀液 | 0.5ml | 2.5ml | 5ml |
异丙醇 | 1ml | 5ml | 10ml |
75%乙醇 | 1ml | 5ml | 10ml |
DNA溶解液 | 100μl | 0.5ml | 1ml |
产品组成:
试剂名称 | 50T | 100T |
10×红细胞裂解液 | 30ml | 60ml |
白细胞裂解液 | 30ml | 60ml |
蛋白沉淀液 | 30ml | 60ml |
DNA溶解液 | 15ml | 30ml |
操作步骤:
以1ml全血为例
1. 样品的处理:在血液中加入3倍体积的1×红细胞裂解液(请确认已经稀释过),充分颠倒混匀,12000rpm离心 1min(如为大量提取并且为大离心机,可11000转离心5min),小心吸去上清,再加入2倍体积的1×红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。
2. 向沉淀中加500ul白细胞裂解液,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀。65℃水浴10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。
3. 加入500ul蛋白沉淀液,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm离心5min,小心吸取 上清(不要吸到下层沉淀或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,如还有沉淀物,可再次离心。
4. 在上清中加入1ml异丙醇,混匀。12000rpm离心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,弃掉上清。
5. 向离心管中加入1ml 75%乙醇,12000rpm离心5min,弃去上清液。可再次短暂离心用移液器去除残余上清。
6. 将离心管敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,否则乙醇可能影响后续的实验如酶切、PCR等。
7. 向离心管中加入100-300ul DNA溶解液,室温放置让DNA自然溶解。如果DNA难于溶解,可室温放置过夜或将 离心管置于50-60℃水浴中水浴加热5min。
注意事项:
1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。
3. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
保存条件:
室温(15-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。
产品介绍: