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产品基本说明:
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可Γ大限度去 除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 |
全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法)
产品货号:26238
产品规格:50T/100T
产品简介:
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可Γ大限度去 除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
产品组成:
试剂名称 | 50T | 100T |
RNase A | 1mL | 1mL×2 |
蛋白酶K | 1mL | 1mL×2 |
红细胞裂解液 | 120mL | 120mL×2 |
溶液A | 15mL | 25mL |
溶液B | 15mL | 30mL |
漂洗液 | 15mL | 15mL×2 |
洗脱液 | 10mL | 20mL |
吸附柱 | 50个 | 100个 |
收集管 | 50个 | 100个 |
操作步骤:
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1. 样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lmL-1mL 血液样品):
a. 在血液样品中加入3倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,室温放置2-5min,12000rpm离心2min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200μL溶液A,振荡至彻底混匀。
b. 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200μL 溶液A,振荡至彻底混匀。
2. 向悬浮液中加入20μL的RNase A (10mg/mL),充分颠倒混匀,室温放置10min。
3. 加 20μL-30μL的蛋白酶K( 10mg /mL ),充分颠倒混匀,60℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。
4. 加入100μL的溶液B,充分颠倒混匀,若出现浑浊,可放至60℃水浴10min。
5. 加入等体积的无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。
6. 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8. 向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
9. 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心2min。
11. 离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。
注意事项:
1. 本试剂盒置于室温( 15-25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。
2. 常用的血液抗凝剂EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
4. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5. 绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6. 洗脱缓冲液的体积Γ好不少于50μL,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影 响;若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
保存条件:
RNaseA、蛋白酶K于-20℃保存;其它试剂室温(15-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。
产品介绍: