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产品基本说明:
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从细菌中提取基因组,每个吸附柱Γ高可吸附10μg的DNA,同时Γ大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化提取的基因组纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。 |
细菌基因组提取试剂盒
产品货号:27102
产品规格:50次/100次
产品简介:
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从细菌中提取基因组,每个吸附柱Γ高可吸附10μg的DNA,同时Γ大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化提取的基因组纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
包装清单:
产品信息 | 50次 | 100次 | 储存条件 |
Re-Suspension Buffer | 22.5ml | 45ml | 室温 |
Lysis Buffer | 30ml | 60ml | 室温 |
Buffer PS | 10ml | 20ml | 室温 |
Buffer PW | 9ml(使用前加入36ml无水乙醇) | 18ml(使用前加入72ml无水乙醇) | 室温 |
Buffer EB | 2.5ml | 5ml | 室温 |
RNase A | 100μl | 200μl | -20℃ |
Spin Columns | 50个 | 100个 | 室温 |
Collection Tubes | 50个 | 100个 | 室温 |
自备试剂:无水乙醇。
操作步骤:
1. 收集适量细菌于1.5ml离心管中,8000rpm离心5min,吸弃上清。加入400μl Re-Suspension Buffer将菌体重悬。
2. 8000rpm离心5min,吸弃上清留沉淀。加入600μl Lysis Buffer,用移液器轻轻吹匀后于60℃孵育5min。
3. 室温静置5min,加入RNase A 2μl,上下颠倒混匀3次,37℃孵育20min。
4. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入200μl Buffer PS,12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5. 将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
7. 注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8. 重复步骤6。
9. 12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
10. 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11. 将吸附柱放到一个新的1.5 ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加50μlBuffer EB,室温放置2分钟。12000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
(1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
(2)为了提高基因组的提取量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置2分钟,13,000 rpm离心1分钟。
(3)洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。
注意事项:
1. Γ次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2. 所有离心步骤均可室温下进行。
产品介绍: