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产品基本说明:
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种细胞中的基因DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可Γ大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。 |
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)
产品货号:26151
产品简介:
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种细胞中的基因DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可Γ大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、 Southern杂交等实验。
包装清单:
产品名称 | 50次 | 200次 |
缓冲液GA(Buffer GA) | 15 ml | 50 ml |
缓冲液GB(Buffer GB) | 15 ml | 50 ml |
缓冲液GD(Buffer GD) | 13 ml | 52 ml |
漂洗液PW(Buffer PW) | 15 ml | 50 ml |
洗脱缓冲液TE(Buffer TE) | 15 ml | 60 ml |
Proteinase K(20mg/ml) | 1 ml | 4×1 ml |
吸附柱CB3 (Spin Columns CB3) | 50个 | 200个 |
收集管(2 ml)(Collection Tubes 2 ml) | 50个 | 200个 |
选配试剂:
红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer);RNase A(100mg/ml)。
储存条件:
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
提取得率:
材料 | 提取量 | DNA得量 |
哺乳动物全血 | 100-400μl | 3-10μg |
禽类、两栖类全血 | 5-20μl | 5-40μg |
动物细胞培养液 | 106 -107 cells | 5-30μg |
动物组织 | 30mg | 10-30μg |
产品特点:
简单快速:1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
广 泛:适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。
超 纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。
操作步骤:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料
a.如提取材料为血液,可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足200μl可加缓冲液GA补足。
注意:如需处理更大体积血液,如300μl-1ml,应按以下步骤操作:在样品中加入3倍体积红细胞裂解液(例如,300μl血液加入900μl红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置5 min,期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心1min(若离心机Γ高转速不允许,可3000 rpm(~3,400×g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉淀,加200μl缓冲液GA,振荡至彻底混匀。 (红细胞裂解液本公司另外有售)
b.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5-20 μl,可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。
c.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1 min,倒尽上清,加200 μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮。
d.动物组织(脾组织用量应少10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后10,000rpm(~11,200×g)离心1 min,倒尽上清,加200μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮。
注意:如果需要去除RNA,可加入4μl RNaseA(100mg/ml)溶液(客户自备),振荡15 sec,室温放置5min。
2. 加入20μl Proteinase K溶液,混匀。
a.提取血液基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步。
b.提取细胞基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步。
c.提取组织基因组时,加入Proteinase K混匀后,在56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。
注意:不同组织裂解时间不同,通常需1-3 h即可完成(鼠尾需要消化过夜)。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。
3. 加入200μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去 除管盖内壁的水珠。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜 色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。
4. 加人200μl无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm(~13,400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5min,12,000 rpm (~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗 脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min。
注意事项 :
请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. Γ次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3. 若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
4. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
产品介绍: