SAINT-BIO/尚宝生物 26224 石蜡包埋组织基因组提取试剂盒

石蜡包埋组织基因组提取试剂盒

产品货号：26224

产品规格：50T/100T

产品简介：

本试剂盒采用特殊的脱蜡液和裂解条件释提取石蜡包埋组织切片中的DNA，克服了福尔马林交联造成的抑制效应。该试剂盒通过特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，将高品质的DNA纯化至小洗脱体积中。提取的基因组完整性好，纯度高，质量稳定可靠。

产品组成：

操作步骤（仅供参考）：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 样本处理

a. 石蜡切片：取石蜡切片（5-10μm厚，1×1cm²大小）5-8张。

b. 石蜡块：手术刀刮取约30mg的组织样本（尽量去除多余的石蜡）。注意：如果样品表面暴露于空气中，Γ初刮取的2-3 片弃掉不用。

c. 福尔马林等固定液中的样本：取30mg样本，用手术刀切为数块,置于1.5ml离心管中，加入500μl PBS (0.01M，pH7.4)涡旋振荡混匀,12,000rpm室温离心1min, 弃上清，重复3次,然后从步骤7开始操作。

2. 脱蜡（二选一）

a. 脱蜡液脱蜡 加入lml脱蜡液，充分振荡，65℃水浴30min，再次充分振荡，4℃下15000rpm离心15min，弃上清再加1ml脱蜡液，重复3遍。然后从步骤7开始操作。

b. 二甲苯脱蜡 将石蜡切片或石蜡块样本装于1.5ml无菌离心管中，加入1ml二甲苯，剧烈涡旋10-15s。然后从步骤3开始操作（二甲苯需要客户自备）。

3. 12000rpm室温离心2min，弃上清。注意：不要倒掉沉淀。

4. 在上述管中加入1ml无水乙醇，涡旋混匀10s。

5. 12,000rpm(~13,400×g )室温离心2min，弃上清。注意：不要倒掉沉淀。

6. 室温放置5-10min，充分挥发乙醇。

7. 向沉淀中加入200μl缓冲液A和20μl蛋白酶K，充分混匀，56℃水浴消化1-3h直至样本完全裂解。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。

8. 加入200ul体积溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于75℃15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。

9. 加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

10. 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

11. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

12. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

13. 12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

14. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液， 室温放置5min，12000rpm离心2min。

15. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项：

1. 试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。

4. 洗脱缓冲液的体积Γ好不少于50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

5. 本产品所提DNA的完整性依赖于样本类型、储存时间以及固定条件。如果甲醛固定时间过长（超过24h）或样本存放时间过久（＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。

有效期：

室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2-8℃保存时间更长。RNase A和蛋白酶K-20℃保存。