SAINT-BIO/尚宝生物 26131 细胞、组织核蛋白提取试剂盒

细胞、组织核蛋白提取试剂盒

产品货号：26131

产品内容：

操作步骤：

细胞核蛋白提取

1. 请在蛋白抽提前取出Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer进行预冷。

2. 收集细胞于1.5ml 离心管中，3000rpm离心去上清。估算所收集细胞体积（Packed Cell Volume，PCV）。

以下步骤以100μL细胞体积为例，具体实验可根据细胞数按相应倍数放大。

3. 每100μL PCV加500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含DTT及蛋白酶抑制剂)，用10μL枪头轻轻吹匀20-30次，避免泡沫。

4. 冰上孵育15min (每5min用10μL枪头轻轻吹匀20次)，4℃2000 rpm离心5min。

5. 用移液器吸弃上清，于沉淀中加入200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含DTT及蛋白酶抑制剂)。

a．将沉淀转移至玻璃匀浆器中，冰上匀浆5-10次；或b.用1ml注射器（5号针头）反复吹吸沉淀溶液5次。

可选步骤：此时可去少量样品用台盼蓝染色液染色，未裂解的活细胞不会被染色，裂解后的可被染色。

6. 4℃12000-14000rpm离心20min。

7. 将上清转移至新1.5ml 离心管中，此上清为细胞质蛋白，沉淀为细胞核。

8. 于沉淀中加入70μL Extraction Buffer  (含DTT及蛋白酶抑制剂)，冰上孵育30min，每隔5min轻轻上下混匀10次。

9. 4℃ 12000-16000rpm离心10min。

10. 收集上清-20℃保存，此提取液即为细胞核蛋白。

组织核蛋白提取

1. 称取50mg组织，将组织块用PBS润洗，吸弃PBS并转移至匀浆器中。

2. 每50mg组织加500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含DTT及蛋白酶抑制剂)。

3. 冰上匀浆15-20次至细胞破碎。

4. 收集匀浆液，4℃ 12000-14000rpm离心20min。

5. 将上清转移至新1.5ml 离心管中，此上清为细胞质蛋白，沉淀为细胞核。

6. 于沉淀中加入70μL Extraction Buffer  (含DTT及蛋白酶抑制剂)，冰上孵育30min，每隔5min轻轻上下混匀10次。

7. 4℃ 12000-16000rpm离心10min。

8. 收集上清-20℃保存，此提取液即为细胞核蛋白。

注意事项：

1. 如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。

2. 所有样品操作请置于冰上进行。

3. 可以采用更高的速度来离心。

4. 实验开始前需每1400μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer/Extraction Buffer加入14μL DTT溶液。

5. 根据实验需求，Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer/Extraction Buffer使用前加入合适的蛋白酶抑制剂。

6. 本试剂盒中Hypotonic Buffer用于组织核蛋白提取，针对较脆弱组织及细胞核蛋白提取请选用Isotonic Buffer。