SAINT-BIO/尚宝生物 BA1007 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒

（紫外分光光度法）

产品货号：BA1007

产品规格：50管/48样

产品简介：

磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP⁺生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前配制，加入5mL试剂一，混匀；

2. 试剂三：临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

需自备的仪器和用品： 

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤（仅供参考）：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 

称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清粗酶液，待测。 

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于37℃水浴预热30min以上。

3. 加样表：（在比色皿依次加入）

于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。记ΔA测定=A2测定-A1测定，ΔA空白=A2空白-A1空白。

三、6PGDH活力单位的计算

（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。

6PGDH酶活性(U/mg prot) =[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×10⁹×V反总]÷(Cpr×V样)÷T

 =536×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

（2）按样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。

6PGDH酶活性(U/g质量) =[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×10⁹×V反总]÷(W÷V样总×V样)÷T

=536×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，0.001L；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.1mL；V样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，3min；W：样本质量，g。

注意事项：

1. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融；

2. 试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存1周。

3. 若样本初始（0s）读值大于0.5且ΔA测定小于0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。