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SAINT-BIO/尚宝生物 BA1013 α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性检测试剂盒(可见分光光度法)

α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能专一地催化α-半乳糖苷键的水解,主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要,种子萌发初期,其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗,为种子的萌发提供Γ初的能量来源,后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。 α-GAL分解对-硝基苯-α...
货号: T4508153
规格: 50管/24样
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T4508153 50管/24样 SAINT-BIO/尚宝生物
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  产品基本说明:

α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能专一地催化α-半乳糖苷键的水解,主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要,种子萌发初期,其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗,为种子的萌发提供Γ初的能量来源,后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。
α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有Γ大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。 

α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性检测试剂盒(可见分光光度法)

产品货号:BA1013

 

产品规格:50/24

 

产品简介:

α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能专一地催化α-半乳糖苷键的水解,主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要,种子萌发初期,其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗,为种子的萌发提供Γ初的能量来源,后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解

α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有Γ大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

 

产品组成:

产品组成

规格

保存条件

提取液

液体50mL×1

4

试剂一

粉剂×1

-20

试剂二

液体15mL×1

4

试剂三

液体80mL×1

4

标准品

液体1mL×1

4

溶液的配制:

1. 试剂一:临用前每瓶加入5mL双蒸水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存;

2. 标准品:5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。

 

需自备的仪器和用品: 

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

 

操作步骤(仅供参考)

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 

1. 细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),15000g4℃,离心20分钟,取上清,置冰上待测。

2. 组织的处理:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;15000g4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2. 标准液的处理:用蒸馏水将标准液稀释至200100502512.56.250nmol/mL

3. 样本测定(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

试剂一

200

-

-

蒸馏水

-

200

-

试剂二

250

250

-

样本

50

50

-

迅速混匀,放入37℃准确水浴30min

标准液

-

-

500

试剂三

1000

1000

1000

充分混匀,室温静置2min400nm处测定吸光值A。ΔA=A测定管-A对照管。

三、α-GAL活性计算 

1. 标准曲线的建立:

根据标准管的吸光度(y,各标准管吸光值减去浓度为零的标准管的吸光值)和浓度(xnmol/mL)建立标 准曲线,将ΔAy)带入标准曲线中,计算样本生成的产物量xnmol/mL

2. α-GAL活性计算

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr

蛋白浓度需要另外测定。

(2)按样本质量计算

单位的定义:每g组织每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL活力(U/g质量)=(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W

(3)按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLV反总:反应体系总体积,0.5mLV样:加入反应体系中样本体积,0.05mLV样总:加入提取液体积,1mLW样本质量,g1000:细胞或细菌总数,1000万;T:反应时间,0.5h

 

 




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