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产品基本说明:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。 |
β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
产品货号:BA1931
产品规格:50T/24S
产品简介:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体50mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 粉剂×2支 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体42mL×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 试剂一:临用前取1支加1.6mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;
2. 标准品:10mg无水葡萄糖。临用前加入1mL蒸馏水溶解,配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用,2-8℃保存2周。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200w超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
3. 标准品稀释表。
序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
实验中每个标准管需100µL标准溶液。
4. 样本测定(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 100 | 100 | - | - |
标准液 | - | - | 100 | - |
蒸馏水 | - | 100 | 100 | 200 |
试剂一 | 100 | - | - | - |
充分混匀,放入37℃水浴60min。 | ||||
试剂二 | 600 | 600 | 600 | 600 |
充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,540nm处记录各管吸光值A,ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需做1-2次。
如果吸光值大于2,可以用提取液对样本稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数)。
三、β-1,3-GA活性计算
1. 标准曲线的建立:
根据标准管吸光度 x(A标准管-A空白管)和浓度(y,mg/mL)建立标准曲线,将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/mL)。
2. β-1,3-GA活性计算:
(1)按蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y÷Cpr
(2)按样本质量计算 单位的定义:
每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/g 质量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y÷W
(3)按细菌或细胞数量计算
单位的定义:每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/104 cell)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W: 样本质量,g;T:反应时间,60min=1h;500:细菌或细胞总数,万。
产品介绍: