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产品基本说明:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可 诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。 |
β-1,3葡萄聚糖(β-1,3-GA)活性检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1022
产品规格:100管/48样
产品说明:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可 诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体100mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 液体30mL×1瓶 | 4℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃ |
溶液的配制:
1. 试剂一:临用前加3.5mL蒸馏水溶解,用不完的试剂4℃保存;
2. 标准品:10mg无水葡萄糖,临用前加入1mL蒸馏水溶解,配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用,4℃可保存1周。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破菌碎细或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步驟
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
3. 样本测定,(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 35 | 35 | - | - |
标准液 | - | - | 35 | - |
双蒸水 | - | 35 | 35 | 70 |
试剂一 | 35 | - | - | - |
充分混匀,放入37℃水浴60min | ||||
试剂二 | 230 | 230 | 230 | 230 |
充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中,540nm处记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用提取液对样本稀释后测定,ΔA=A测定-A对照。
三、β-1,3-GA活性计算
1. 标准曲线的建立:
根据标准管吸光度 x(A标准管-A空白管)和浓度(y,mg/mL)建立标准曲线,将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/mL)。
2. β-1,3-GA活性计算:
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y ÷Cpr
(2) 按样本质量计算
单位的定义:每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/g 质量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y ÷W
(3) 按细菌或细胞数量计算
单位的定义:每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/104cell)=(y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
V1:加入反应体系中样本体积,0.035mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,60min=1h;500:细菌或细胞总数,500万。
产品介绍: