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产品基本说明：
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β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作 用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有Γ大吸收峰，通过测定吸光值升高 速率来计算β-GC活性。 |
β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1020
产品规格：100管/48样
产品说明:
β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作 用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。
β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有Γ大吸收峰，通过测定吸光值升高 速率来计算β-GC活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体100mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂二 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
试剂三 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
标准品 | 液体1mL×1支 | 4℃ |
溶液的配制：
试剂一：临用前每瓶加入12mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰 和蒸馏水
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
2. 组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上 待测。
二、测定步驟
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2. 标准样本的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1μmol/mL标准液，十倍稀释到100nmol/mL， 用蒸馏水倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/mL。100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL做标准液。
3. 加样表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
试剂一 | 120 | ||
试剂二 | 150 | 150 | |
样本 | 30 | 30 | |
充分混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） | |||
试剂一 | 120 | ||
充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂） | |||
上清液 | 70 | 70 | |
标准液 | 70 | ||
试剂三 | 130 | 130 | 130 |
充分混匀，室温静置2min后，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。 每个测定管需设一个对照管。 | |||
三、β- GC活力单位的计算
1. 标准曲线建立：
根据标准管的浓度（x）和吸光度（减去浓度为0标准管的OD值，y），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA （y）带入公式计算样本产物浓度x（nmol/mL）。
2. 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr
蛋白浓度需要另外测定。
3. 按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/g 质量) = (x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W
4. 按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；1000：细胞或细菌总数，1000万；T：反应时间，0.5h。
产品介绍：
