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产品基本说明:
GDH(EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。 |
谷氨酸脱氢酶(GDH)活性检测试剂盒(紫外分光光度法)
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号:BA1123
产品规格:50管/48样
产品简介:
GDH(EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。
产品内容:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体60mL×瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
2、称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤:
1、紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)工作液的配制:临用前将试剂一加入试剂二中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;
(2)取1mL工作液和0.05mL样本于光径为1cm的1mL石英比色皿中,混匀,加样本的同时开始计时,在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。
注:当ΔA大于0.5时,将样本进行稀释后测量。
三、GDH活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T=675×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=675×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞数量计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH(U/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=1.35×ΔA
V反总:反应体系总体积,1.05×10-3L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
1、当∆A大于0.5时,将样本进行稀释后测量。
2、由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
产品介绍: